肝脏是人体内重要的解毒器官，同时也是一个重要的代谢中心。在肝脏中，DNA的提取和含量测定是非常重要的实验技术，可以为研究肝脏功能和疾病发生机制提供有价值的信息。本文将介绍肝脏中DNA提取及DNA含量测定的相关技术。

一、肝脏中DNA的提取

肝脏中DNA的提取是进行后续DNA含量测定的基础。目前，常用的肝脏DNA提取方法有酚/氯仿法、醇提法、磁珠法等。

1.酚/氯仿法

酚/氯仿法是最常用的DNA提取方法，其操作简便、效果稳定。具体操作步骤如下：

（1）取新鲜肝脏组织，将其切成小块，然后用液氮迅速冷冻，研磨成粉末。

（2）将粉末放入1.5ml离心管中，加入400μl酚/氯仿混合液（1:1），剧烈振荡10秒，然后室温静置3分钟。

（3）4℃下，以12000rpm离心10分钟。

（4）吸取上层水相，加入等体积的氯仿，混匀后再次离心。

（5）吸取上层水相，加入等体积的异丙醇，混匀后再次离心。

（6）吸取上层水相，放入冰浴中，加入1/10体积的3M NaAc，混匀后再次离心。

（7）将沉淀物放入新的1.5ml离心管中，加入50μl TE缓冲液，混匀后室温放置30分钟。

（8）用PCR仪进行DNA片段的纯化。

2.醇提法

醇提法与酚/氯仿法相比，操作简便，能有效去除蛋白质，适用于肝脏组织的DNA提取。具体操作步骤如下：

（1）取新鲜肝脏组织，将其切成小块，然后用液氮迅速冷冻，研磨成粉末。

（2）将粉末放入1.5ml离心管中，加入400μl醇提液，剧烈振荡10秒，然后室温静置3分钟。

（3）4℃下，以12000rpm离心10分钟。

（4）吸取上层水相，加入等体积的醇提液，混匀后再次离心。

（5）吸取上层水相，放入冰浴中，加入1/10体积的3M NaAc，混匀后再次离心。

（6）将沉淀物放入新的1.5ml离心管中，加入50μl TE缓冲液，混匀后室温放置30分钟。

（7）用PCR仪进行DNA片段的纯化。

3.磁珠法

磁珠法操作简单，能有效去除蛋白质，适用于肝脏组织的DNA提取。具体操作步骤如下：

（1）取新鲜肝脏组织，将其切成小块，然后用液氮迅速冷冻，研磨成粉末。

（2）将粉末与磁珠混合，放入裂解液中，剧烈振荡10分钟。

（3）用磁力架将磁珠与肝脏组织粉末分离，收集磁珠溶液。

（4）将磁珠溶液放入新的离心管中，加入等体积的乙醇，混匀后4℃下以12000rpm离心10分钟。

（5）吸取上层水相，放入冰浴中，加入1/10体积的3M NaAc，混匀后再次离心。

（6）将沉淀物放入新的1.5ml离心管中，加入50μl TE缓冲液，混匀后室温放置30分钟。

（7）用PCR仪进行DNA片段的纯化。

二、肝脏中DNA含量的测定

DNA含量的测定通常采用琼脂糖凝胶电泳法。具体操作步骤如下：

（1）取提取得到的DNA样品，加入适量TE缓冲液，混匀后进行浓度梯度稀释。

（2）取1μl稀释后的DNA样品，加入10μlloading buffer，混匀后放入冰浴中。

（3）将凝胶板放入电泳槽中，加入1xTBE缓冲液，插上梳子，然后将loading buffer中的DNA样品倒入梳子中。

（4）盖上电泳盖，连接电源，选择适当的电流和电压进行电泳。

（5）电泳结束后，将凝胶板放入显影液中，